大鼠膀胱上皮細胞提取物培養(yǎng)

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產(chǎn)品描述：
大鼠膀胱上皮細胞提取物【Rat Bladder: Normal Bladder Derivatives】
     大鼠膀胱上皮細胞提取物培養(yǎng)大鼠膀胱上皮細胞提取物是從大鼠原代膀胱上皮細胞提取的，大鼠原代膀胱上皮細胞從正常大鼠膀胱組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。
技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
大鼠膀胱上皮細胞提取物培養(yǎng)凍存細胞時必須使用的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含0% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細胞懸液離心5至0分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  °C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
以下是大鼠膀胱上皮細胞提取物培養(yǎng)的相關(guān)產(chǎn)品：

HRP標(biāo)記的兔抗山羊IgG 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-Goat IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的兔抗人IgG 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-human IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的兔抗人IgM 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-human IgM 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-mouse IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的兔抗豬IgG 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-pig IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-rat IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 英文名：HRP-conjugate Mouse anti-rabbit IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的鏈霉親和素 英文名：HRP-conjugate Streptaviin 冷凍（-20℃） 避光  

HRP標(biāo)記的兔抗水貂IgG 英文名：HRP-conjugate Rabbit anti-Mink IgG 冷凍（-20℃） 避光

標(biāo)記的山羊抗人IgG 英文名：Biotin-conjugate Goat anti-human IgG 冷凍（-20℃） 避光

標(biāo)記的山羊抗兔IgG 英文名：Biotin-conjugate Goat anti-Rabbit IgG 冷凍（-20℃） 避光

標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 英文名：Biotin-conjugate Mouse anti-rabbit IgG 冷凍（-20℃） 避光

大鼠膀胱上皮細胞提取物培養(yǎng)Germacrone 吉馬酮 6902-9-6  20mg

Biochanin A 鷹嘴豆芽素A 49-80-5  20mg

Vanillic acid 香草酸 2-34-6  00mg

L-Rhamnose L-鼠李糖 0030-85-0  00mg

MethyleneGreen 次甲綠 g  瓶

(-)-Huperzine A 0258-79-6  20mg

Andrographolide 內(nèi)酯 g  瓶

Neosperidin dihydrochalcone 新二氫查爾酮 20702-77-6  20mg

Riboflavin 核黃素(Vitamin B2) 25g  瓶

Bleomycin A5 Hydrochlorid 鹽酸 0mg  瓶

EDAC -乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽 25g  瓶

細胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細胞復(fù)蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
大鼠膀胱上皮細胞提取物培養(yǎng)出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；