豬轉(zhuǎn)錄因子AP- 酶聯(lián)免疫elisa試劑盒保存

豬轉(zhuǎn)錄因子AP- 酶聯(lián)免疫elisa試劑盒保存標(biāo)本要求
．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可向客服索取說(shuō)明書》》 在線索取
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中 先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘。
0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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產(chǎn)品名稱：
英文名稱： AP- ELISA KIT
規(guī)格：96T/48T
存儲(chǔ)條件：2-8℃
有效期：6個(gè)月
特異性:本ELISA檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的，且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。
檢測(cè)種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。
適用范圍：此試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)，禁用于臨床 。

類型和操作步驟
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體，
②酶標(biāo)記的抗原或抗體，
③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
（一）雙抗體夾心法、
（二）一步法、
（三）間接法測(cè)抗體、
（四）競(jìng)爭(zhēng)法。
技術(shù)流程:
一、雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)
、用緩沖液將抗體稀釋至-0ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.倍，即為陽(yáng)性。
二、間接法(檢測(cè)未知抗體)
、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至-0ug/ml， 每孔加0.ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.倍，即為陽(yáng)性。

APP    重組人 Beta-amyloid 39 / Beta-APP39 蛋白 (aa 672-70, His & GST 標(biāo)簽)    BstXI
CD47    重組人 CD47 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)    KspAI (HpaI)
TNFRSFB    重組人 TNFR2 / CD20b / TNFRSFB 蛋白 (aa -268, 96 Met/Arg, His 標(biāo)簽)    KspAI (HpaI)
PROC    重組人 PROC / Protein C / PROC 蛋白 (His 標(biāo)簽)    MnlI
IL2A & IL27B    重組人 IL2A & IL27B Heterodimer 蛋白    MnlI
ITGA5 & ITGB6    重組人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 蛋白    BseDI (BsaJI)
EDEM2    重組人 EDEM2 / C20orf3 蛋白 (His 標(biāo)簽)    BseDI (BsaJI)
DCUND    重組人 DCUND / SCCRO 蛋白 (His 標(biāo)簽)    PauI (BssHII)
ARF5    重組人 ARF5 / ADP-ribosylation factor 5 蛋白 (His 標(biāo)簽)    PauI (BssHII)
CBR3    重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白 (His 標(biāo)簽)    HphI
STX3    重組人 STX3 / Syntaxin 3 蛋白 (His 標(biāo)簽)    HphI
MAPRE3    重組人 MAPRE3 / EB3 蛋白 (His 標(biāo)簽)    RsaIZamboni 固定液    250 mL    
CAS59-43-8    維生素 B    0g
2-000-5     成骨細(xì)胞生長(zhǎng)因子    5mL
20720-50    柱式凍存血液 DNAout    50 次
醛縮酶    00mg    
dCTP 溶液，00mM    0.5mL    
RNase-free Tris HCl,M,pH 8.5    00mL    
RecJf 核酸外切酶    000U    
CAS590-46-5    甜菜堿鹽    00g
2-265    EBY00 酵母菌種    mL
一管式拭子 DNAout    20 次    
可逆性銅染試劑盒    套    
葡聚糖 T-0    0g    
F2K 培養(yǎng)基 ( 含 % 雙抗 )    500mL    
柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒    50 次    
05-500    MTT 檢測(cè)試劑盒    500 次
70503T-50    DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (250-500 bp)    50 次
化蛋白 G    0.5mg